第一种方法:API

using System.IO;  
using System.Runtime.InteropServices;  
 
[DllImport("kernel32.dll")]  
public static extern IntPtr _lopen(string lpPathName, int iReadWrite);  
[DllImport("kernel32.dll")]  
public static extern bool CloseHandle(IntPtr hObject);  
 
public const int OF_READWRITE = 2;  
public const int OF_SHARE_DENY_NONE = 0x40;  
public readonly IntPtr HFILE_ERROR = new IntPtr(-1);  
private void button1_Click(object sender, EventArgs e)  
{  
    string vFileName = @"c:\test.bmp";  
    if (!File.Exists(vFileName))  
    {  
        MessageBox.Show("文件不存在!");  
        return;  
    }  
    IntPtr vHandle = _lopen(vFileName, OF_READWRITE | OF_SHARE_DENY_NONE);  
    if (vHandle == HFILE_ERROR)  
    {  
        MessageBox.Show("文件被占用！");  
        return;  
    }  
    CloseHandle(vHandle);  
    MessageBox.Show("没有被占用！");  
}

第二种方法:FileStream

public static bool IsFileInUse(string fileName)  
 {  
        bool inUse = true;  
  
        FileStream fs = null;  
        try  
        {  
  
            fs = new FileStream(fileName, FileMode.Open, FileAccess.Read,  
  
            FileShare.None);  
  
            inUse = false;  
        }  
        catch  
        {   
        }  
        finally  
        {  
            if (fs != null)  
  
                fs.Close();  
        }  
        return inUse;//true表示正在使用,false没有使用  
}